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项目编号:****
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项目名称:mRNA表达载体构建服务
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采购方式:公开询价邀请询价竞争性谈判竞争性磋商单一来源采购项目比选商品比选
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评审办法: 有效最低价 综合评估法
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项目类型: 技术服务
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预算金额***
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采购单位:***
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联系人:***
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电话:***
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地址:***
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邮箱:***
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mRNA表达载体构建服务 品牌:无 货号/型号:无 规格:1024个质粒
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一、质粒合成平台要求 ★1、投标人应根据甲方提供的明确序列提出质粒合成或重组方案,对本项目的质粒合成和验证服务必须采用投标方设备完成,不可外包。提供公司使用基因合成平台的能力证明**台技术指标 二、质粒合成技术指标及工艺要求 1、投标方根据甲方提供的明确序列,通过将序列插入目的质粒的方案合成完整质粒。质粒载体为常见表达载体,并在目的序列两侧包含酶切位点(SalI) 2、质粒包含甲方提供的完整序列 ★2.1质粒包含T7启动子固定序列“TAATACGACTCACTATAGGAG” 2.2*包含≥32个5’UTR可变区(甲方提供,序列长度范围50-400bp) ★2.3包含kozak-EGFP的核心编码区(甲方提供,长度范围50-756bp) 2.4*包含≥32个3’UTR可变区(甲方提供,长度范围50-428bp) 2.5*包含90-110bp Poly A尾(衔接在3’UTR尾部) 3、共合成≥1024条包含不同目的片段的完整质粒 4、对目的序列进行PolyA尾序列优化 4.1要求设计含非A碱基的poly(A)尾,并使用密码子优化工具对序列进行优化 4.2 要求poly(A)结构只被1条引物覆盖或直接克隆至载体 5、投标方需对扩增菌株进行优化 5.1要求使用低温培养、采用生长较慢菌株、特殊培养基,减缓细菌生长,降低质粒复制压力,提高质粒稳定性,减少长Poly(A)序列质粒的丢失并增加超螺旋比例,≥85%异常处理 5.2结合要求4,若在验证过程中发现Poly(A)序列不完整时,需用已验证质粒重新转化扩繁,减少扩繁次数对稳定性的影响 6、要求投标方使用特殊合成的方式合成重组引物(含poly(A)结构的引物采用特殊合成工艺 ) 7*、最终质粒验收要求为包含明确目的片段,无无义突变,poly A尾长度在95-105bp范围内,内毒素≤0.1 EU/μg、≤0.01 EU/μg、≤0.005 EU/μg;PCA:采用对高AT**的T8高保真DNA聚合酶扩增;提供4ug质粒和1管含正确重组质粒的Top10穿刺菌;要求合成周期≤30个工作日 三、质粒检验报告 1.要求投标方发货时附带发货报告1份 1.1发货报告中应包含一代测序结果,测通固定片段T7+随机片段1+固定编码区+随机片段2+固定ployA尾 1.2同时包含二代全质粒测序结果 1.3同时包含COA文件
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