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四川肿瘤医院三住三层实验室改造项目

审批

四川-成都-武侯区

发布时间： 2025年12月31日

项目详情

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1、建设项目基本信息

企业基本信息

建设单位名称：建设单位代码类型：建设单位机构代码：建设单位法人：建设单位联系人：建设单位所在行政区划：建设单位详细地址：

****
125********723900G	林桐榆
李扬	省市**区
省市**区人民南路四段55号

建设项目基本信息

项目名称：项目代码：项目类型：建设性质：行业类别（分类管理名录）：行业类别（国民经济代码）：工程性质：建设地点：中心坐标： ****机关：环评文件类型：环评批复时间：环评审批文号：本工程排污许可证编号：排污许可批准时间：项目实际总投资(万元)：项目实际环保投资(万元)：运营单位名称：运营单位组织机构代码：验收监测(调查)报告编制机构名称：验收监测(调查)报告编制机构代码：验收监测单位：验收监测单位组织机构代码：竣工时间：调试起始时间：调试结束时间：验收报告公开起始时间：验收报告公开结束时间：验收报告公开形式：验收报告公开载体：

**医院**实验室改造项目

2021版本:098-专业实验室、****基地	M7340-M7340-医学研究和试验发展
	省市**区人民南路四段55号
经度:104.0662 纬度: 30.6122	****环境局
	2023-05-05
**环审〔2023〕07号	****
2020-07-24	739
38.2	****
125********723900G	****
125********723900G	轻碳（四****公司
****0121MAD6HETE6C	2024-10-31
2024-11-01	2025-09-30
2025-12-03	2025-12-30
	工程建设验收公示网

2、工程变动信息

项目性质

环评文件及批复要求：实际建设情况：变动情况及原因：是否属于重大变动：是否重新报批环境影响报告书(表)文件：

改建	与环评一致
/

规模

环评文件及批复要求：实际建设情况：变动情况及原因：是否属于重大变动：是否重新报批环境影响报告书(表)文件：

**实验室建筑面积为1200m2，共一层。实验室**实验室主要进行细胞研究实验。从细胞分子生物学等层面深入研究细胞，为疾病治疗提供更多理论依据。	与环评一致
/

生产工艺

环评文件及批复要求：实际建设情况：变动情况及原因：是否属于重大变动：是否重新报批环境影响报告书(表)文件：

（1）细胞实验： ①样本细胞：本项目细胞样本主要来源有人源肿瘤细胞、鼠源肿瘤细胞、组织细胞和干细胞等。 ②细胞生长状态观察：经传代或换液后生长状况良好的细胞在显微镜下观察下透明度大、折光性强、轮廓不清；用相差显微镜观察能看清部分细胞细微结构，细胞处于对数生长期时也可见到很多处于分裂期的细胞；细胞生长状态不良时，细胞折光性变弱，轮廓清楚，胞质中常出现空泡、脂滴、颗粒样物质，细胞之间空隙加大，细胞变得不规则，失去正常生长的特点。 ③细胞传代培养：传代细胞时中用电动吸引机去除培养液，用PBS溶液洗2-3次，加适量胰酶消化细胞，前后左右不断摇匀，使胰酶充分铺在整个培养皿中。静置在培养箱中2-3min。取出培养皿在显微镜下观察到细胞变圆，即可用带血清的培养基终止消化。将消化液用移液抢加入1.5mL离心管中，1500rpm离心2min，然后弃去上清。加入新鲜的培养基1mL到1.5 mL离心管中，轻轻悬浮细胞。取适量细胞悬液到新的培养皿中即可。此过程会产生废培养基、废液、废实验耗材和噪声。 ④细胞计数：通过计数板和显微镜对稀释到一定比例的单细胞悬液进行计数。计数时应循一定的路径，对横跨刻度上的细胞，依照“数上不数下，数左不数右”的原则进行计数。计数细胞时，数四个格的细胞总数，对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml细胞悬液中的细胞浓度。细胞浓度（个/ml）＝（四个格内细胞数之和/4）×104×稀释倍数镜下计数时，遇到2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如细胞团占10%以上，需重新吹打混匀后计数。 ⑤细胞冻存：先用对应的培养基配制好含有10 %DMSO的冻存液。之后用同样的方法将培养盘中的细胞胰酶消化下来，吸到1.5mL离心管中，1500 rpm离心3 min。弃去上清，加入适量冻存液悬浮细胞。再分装到冻存管中，每支1mL混合液。之后温度梯度缓冻。将冻存管放入4℃冰箱30min后，转移到-20℃冰箱冷冻30min，随后移入-80℃超低温冰箱过夜或12 h，最后转移到液氮灌中长期保存。此过程会产生废液、废实验耗材和噪声。 ⑥细胞复苏培养：从液氮灌中取出冻存管，置于37℃水浴使其迅速融化，期间不断搅动加速细胞液的融化。迅速将细胞液转移到新的1.5 mL离心管中。之后1500 rpm离心3 min。弃去上清，用新鲜的培养基重新悬浮细胞，最后把细胞接种于新的培养皿中。此过程会产生废液、废实验耗材和噪声。（2）分子克隆实验 ①DNA片段制备：可通过用限制性核酸内切酶将高分子量 DNA 切成一定大小的 DNA 片段；用物理方法(如超声波)取得 DNA 随机片段；在已知蛋白质的氨基酸顺序情况下用人工方法合成对应的基因片段；从 mRNA 反转录产生 cDNA等方式制备DNA片段。 ②载体DNA选择：主要有质粒、噬菌体DNA和拷斯(Cos)质粒三种载体，根据不同载体的特性可进行用于构建不同的生物基因文库、cDNA库和次级克隆。 ③载体与片段连接：DNA分子与载体分子连接是克隆过程中的重要环节之一，方法有： a、粘性末端连接：DNA 片段两端的互补碱基顺序称之为粘性末端，用同一种限制性内切酶消化 DNA 可产生相同的粘性末端。在连接酶的作用下可恢复原样。有些限制性内切酶虽然识别不同顺序，却能产生相同末端。 b、平头末端连接：用物理方法制备的 DNA 往往是平头末端，有些酶也可产生平头末端。平头DNA 片段可在某些 DNA 连接酶作用下连接起来，连接效率不如粘性末端高。 c、同聚寡核苷酸末端连接。 d、人工接头分子连接：在平头DNA 片段末端加上一段人工合成的、具有某一限制性内切酶识别位点的寡核苷酸片段经限制性内切酶作用后就会产生粘性末端。 ④引入寄主细胞：常用两种方法； a、转化或转染：方法是将重组质粒DNA 或噬菌体 DNA(M13)与氯化钙处理过的宿主细胞混合置于冰上，待DNA 被吸收后铺在平板培养基上再根据实验设计使用选择性培养基筛选重组子，通常重组分子的转化效率比非重组DNA 低，原因是连接效率不高，有许多 DNA 分子无转化能力，而且重组后的 DNA 分子比原载体 DNA 分子大，转化困难。 b、转导：病毒类侵染宿主菌的过程称为转导，一般转导的效率比转化高。 ⑤克隆方式选择：主要通过以下方式选择； a、直接筛选：有些载体带有可辨认的遗传标记，能有效地将重组分子与本底区分。 b、间接筛选：有引起载体分子带有一个或多个抗药性标记基因，当外源DNA 插入到抗药基因区后，基因失活，抗性消失。如一质粒有A和B两个抗药性基因当外源基因插入到B基因区后，便只抗A药而不抗B药。因此能在A药培养基上正常生长而不能在B药培养上生长的便是重组分子。 c、核酸杂交：广泛用于筛选含有特异DNA顺序的克隆。方法是将菌落或噬菌斑“印迹”到硝酸纤维膜等支持物上，变性后固定在原位，然后与标记的核酸探针进行杂交。阳性点的位置就是所需要的克隆。 d、免疫学方法：如果重组克隆能在宿主菌中表达就可以用特异的蛋白质抗体为探针，进行原位杂交，选择特异的克隆。本项目在进行分子克隆实验过程中主要会产生废培养基和实验废水。（3）蛋白免疫印迹实验 ①蛋白提取：**医院自制的肿瘤细胞进行培养，弃去培养皿或培养板中的培养基，用预冷的PBS洗1-2次，尽量吸干液体，可直接制备蛋白样品或者放置-80C超低温冰箱暂时保存。制备蛋白样品全程在冰上操作，防止在制备过程中蛋白降解。首先向培养板中加入一定量的的RIPA裂解液，用细胞刮或枪头刮下细胞后转移到预冷的1.5 mL离心管中，冰上裂解30 min。裂解结束后，于4C离心机上，12000 rpm离心15 min，取上清到新的预冷好的1.5 mL离心管中，做好标记。 ②蛋白浓度测定：采用BCA法检测样品中的蛋白浓度。首先将A、B液按照体积比50：1的比例混合好后，每孔加入200 μL混合液和1 μL蛋白裂解液，每个样品设置复孔。参照说明书设定标准曲线用标准蛋白BSA孔。在37℃培养箱中反应30 min后，在多功能酶标仪上测定OD560。计算出样品浓度后用RIPA裂解液调平，加入SDS-PAGE上样缓冲液混匀，之后放在金属干浴锅中95C煮样10 min，取出后放在冰上数分钟离心。样品可直接进行SDS-PAGE电泳实验，也可放在-20 C冰箱保存待后续使用。 ③SDS-PAGE 电泳：将胶板洗干净后夹紧放入电泳槽中，加入新配制的电泳液后拔掉梳子，确保上样孔中和胶板底部没有气泡后开始上样。样品两边的孔需加入蛋白Marker 1μL。先使用80V恒压电泳，待蛋白Marker部分可见时，将电压调升120V。根据需要蛋白的情况，待溴酚蓝条带迁移到胶板底部时方可停止电泳 ④转膜：电泳完毕后，取下胶板，用拨胶板切去浓缩胶部分，然后将分离胶小心铺放在海绵垫和滤纸的转膜夹上。放上已用甲醇活化的PVDF膜，减掉右上角做好标记，用拨胶板小心从一头开始挤压，确保PVDF膜和胶之间没有气泡后夹紧转膜夹，放入电转槽中。确保电源的正负极和胶和膜的顺序。在电泳槽中加满电转液，于冰上恒流250-300mA电转1.5-3 h。也可根据所需要的蛋白分子量设置电转时间和电流大小。 ⑤封闭：电转完成后，将PVDF膜用TBST清洗2-3次，每次10 min。用TBST配制的含有5%脱脂奶粉室温封闭1 h。期间在水平摇床上不断震荡。 ⑥免疫反应：封闭好后切下目的条带并做好标记。用TBST把PVDF膜上的牛奶漂洗干净之后再将标记好的条带放入装有对应一抗的15 mL离心管中4C水平摇床孵育过夜。取出目的条带于塑料盒中用TBST洗3次，每次10 min。然后加入相应二抗室温水平摇床上孵育2-3 h。 ⑦检测显影：将孵育好的PVDF膜置于水平摇床用TBST洗3次，每次10 min。将目的条带蛋白面朝上依次排列好，ECL化学发光液的A液和B液以1：1混匀滴加再膜表面充分覆盖，吸去残液，放于化学发光成像系统曝光检测。本项目在进行蛋白免疫印迹实验过程中主要会产生有机废气、废培养基、实验废水和噪声。（4）免疫组化实验 ①固定、脱水、包埋：取医院自制病人组织放入4%多聚甲醛里面固定3-4小时；**小组织放入包埋盒中，依次进入不同浓度的二甲苯和乙醇溶液；进行脱水，然后进行滴蜡。 ②切片、制片：打开切片机,固定蜡块(可提前4度冰箱预冷一下)，调整刀片和蜡块的距离。然后调整切片厚度，先粗切,看到完整的蜡片并且有组织后切换厚度，调整到自己想要切的厚度。用力均匀，右手摇动切片，左手用毛笔接片。如片子打卷，可以用毛笔按着蜡片的边缘再缓慢切，这样可以得到相对平整的片子。用毛笔和镊子将片子或者带状片子托起,放入水槽中展片，水温在40度左右。然后用防脱片载玻片轻轻捞起,载玻片的边缘尽量不要触碰水槽底部,防止底部气泡上浮残留在片子上。然后标注切片编号放到烤片机上烤片30分钟。 ③脱蜡：进入不同浓度的二甲苯和乙醇溶液进行脱蜡，脱蜡结束后用蒸馏水水洗，使用过氧化氢去除内源性过氧化氢酶。 ④抗原修复：利用微波或者高压进行抗原修复，将包埋过程中某些被石蜡封闭的抗原充分暴露出来。修复完毕后自然冷却至常温。 ⑤封闭：使用PBS缓冲液洗后，在组织上滴加高效背景去除剂100 μL，37 ℃反应30 min。之后再用PBS 洗5 min。再用蒸馏水冲洗，甩干水分，吸干水珠，加入山羊血清封闭液(二抗试剂盒B一滴或者50微升)，放入湿盒内，室温封闭。 ⑥化学染色：用含有5‰BSA的一抗稀释液（1:200-300）4℃孵育过夜，之后用PBS 洗5 min，2次。组织切片上加入HRP酶结合物室温反应2h，后PBS洗5 min，2次。按照试剂盒的配比利用DAB显色液进行DAB显色，镜检观察，当组织出现明显的棕色时放入水终止DAB反应。将切片置于过滤干净的苏木素中5 min，镜检观察看是否需要分化。之后可在自来水洗中蓝。 ⑦脱水：依次放入80%酒精，95%酒精，100%酒精，各2min。 ⑧封片：60C烘箱中烘干片子，中性树脂封片，完全晾干后，显微镜下观察，拍照。本项目在进行免疫组化实验过程中主要会产生有机废气、实验废水、废生物样本。	与环评一致
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环保设施或环保措施

环评文件及批复要求：实际建设情况：变动情况及原因：是否属于重大变动：是否重新报批环境影响报告书(表)文件：

（1）废水：除了实验配置废水、器具前三次清洗废水作为危废暂存在危废暂存间；项目运营过程中产生的综合废水（生活污水+实**医院污水处理站（2000m3/d）处理。项目生活污水和实验废水（综合废水）一同经预医院污水处理站处理达到《医疗机构水污染物排放标准》（GB18466-2005）表2预处理标准排入市政管网，水厂处理，处理达到《省岷江、沱江流域水污染物排放标准》（DB51/2311-2016）标准后排入黄堰河。（2）废气：气溶胶、细胞培养恶臭：本项目细胞间、万级P2负压操作间；分子实验室、免疫组化室、流式细胞室、蛋白提取室等采用独立的新风系统。气溶胶、细胞培养恶臭，通过生物安全柜收集处理后引至三楼平台一体光氧离子废气处理机处理后无组织排放。有机废气：本**实验室密闭抽风收集的方式对检测过程中产生的有机废气进行收集，实验室排风系实验室排风管道，然后引至三楼平台的一体光氧离子废气处理机+二级活性炭吸附装置处理达标后经15m排气筒排放。实验设备泄漏废气：**设备处理样品时，因样品含少量有机试剂，为避免有机试剂泄漏挥发，设置万向罩收集，收集后由一体光氧离子废气处理机处理后，无组织排放至室外。酸性废气：因本项目酸性废气量较少，废气通过通风柜收集后，无组织排放至室外。（3）噪声：优先选用低噪设备（如低噪声风机、空调机等），并加强设备维护；合理布置噪声源设备位置；对空调机、风机等高噪声设备机座进行减振处理，在风机进出口安装消声器，进行消声处理，并做好高噪设备隔音工作；定期对设备进行检修，防止不良工况下的故障噪声产生。（4）固废：生活垃圾定期由环卫部门统一清运，日产日清；废纯水滤芯、废纯水机反渗透膜由供应商回收处置；废包装材料（不沾染试剂及样品）收集后外售综合利用。医疗废弃物（废样品标本）等非化学性医疗危废分类收集、暂存于医废暂存间，并由资质单位统一清运处置；实验配置废水、废弃外包装（沾染化学试剂或药品的废弃外包装）、器具前三次清洗废水、实验废弃物（废移液枪头、废离心管、废移液管、废注射器、废EP管、废针头、废手套、废口罩、废鞋套、废试剂瓶、废培养基等）、生物安全柜废弃滤芯、废紫外灯管、废活性炭等危废分类收集、暂存于危废暂存间，并由资质单位统一清运处置。	与环评一致
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其他

环评文件及批复要求：实际建设情况：变动情况及原因：是否属于重大变动：是否重新报批环境影响报告书(表)文件：

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3、污染物排放量

污染物现有工程（已建成的）本工程（本期建设的）总体工程总体工程（现有工程+本工程）排放方式实际排放量实际排放量许可排放量 “以新带老”削减量区域平衡替代本工程削减量实际排放总量排放增减量废水水量（万吨/年） COD（吨/年）氨氮（吨/年）总磷（吨/年）总氮（吨/年）废气气量（万立方米/年）二氧化硫（吨/年）氮氧化物（吨/年）颗粒物（吨/年）挥发性有机物（吨/年）

0	0	0	0	0
8.908	0.0188	9.05	8.927	0.019
3.275	0.0069	3.3	3.282	0.007
0.4784	0.0023	0.4829	0.481	0.002
0	0	0	0	0
0	0	0	0	0	/
0	0	0	0	0	/
0	0	0	0	0	/
0	0	0	0	0	/
0	0.0066	0.0066	0.007	0.007	/

4、环境保护设施落实情况

表1 水污染治理设施

序号设施名称执行标准实际建设情况监测情况达标情况

污水处理站

《医疗机构水污染物排放标准》（GB18466-2005）表2中预处理标准；《污水排入城镇下水道水质标准》（GB/T31962-2015）B等级

已建

已监测

表2 大气污染治理设施

序号设施名称执行标准实际建设情况监测情况达标情况

1	污水处理站废气处理设施	《恶臭污染物排放标准》（GB14554-93）	已建	已监测
2	试验废气处理设施	《**省固定污染源大气挥发性有机物排放标准》（DB51/2377-2017）；《大气污染物综合排放标准》（GB16297-1996）	已建	已监测

表3 噪声治理设施

序号设施名称执行标准实际建设情况监测情况达标情况

噪声污染防治措施

《工业企业厂界环境噪声排放标准》（GB12348-2008）2类标准；《声环境质量标准》（GB3096-2008）表1中2类标准

已建

已监测

表4 地下水污染治理设施

序号环评文件及批复要求验收阶段落实情况是否落实环评文件及批复要求

表5 固废治理设施

序号环评文件及批复要求验收阶段落实情况是否落实环评文件及批复要求

严格固体废弃物收集、暂存、处置的环境管理。危险废物分类收集暂存，定期交由具有相应危险废物处置资质单位进行处置。

生活垃圾定期由环卫部门统一清运，日产日清；废纯水滤芯、废纯水机反渗透膜由供应商回收处置；废包装材料（不沾染试剂及样品）收集后外售综合利用。医疗废弃物（废样品标本）等非化学性医疗危废分类收集、暂存于医废暂存间，并由******公司统一清运处置；实验配置废水、废弃外包装（沾染化学试剂或药品的废弃外包装）、器具前三次清洗废水、实验废弃物（废移液枪头、废离心管、废移液管、废注射器、废EP管、废针头、废手套、废口罩、废鞋套、废试剂瓶、废培养基等）、生物安全柜废弃滤芯、废紫外灯管、废活性炭等危废分类收集、暂存于危废暂存间，并由**格润****公司统一清运处置。

表6 生态保护设施

序号环评文件及批复要求验收阶段落实情况是否落实环评文件及批复要求

表7 风险设施

序号环评文件及批复要求验收阶段落实情况是否落实环评文件及批复要求

5、环境保护对策措施落实情况

依托工程