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苏州南医大创新中心建设实验室项目

审批

江苏-苏州-张家港市

发布时间： 2026年01月14日

项目详情

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1、建设项目基本信息

企业基本信息

建设单位名称：建设单位代码类型：建设单位机构代码：建设单位法人：建设单位联系人：建设单位所在行政区划：建设单位详细地址：

****
****0500MB1K429804	王黎熔
刘兴旺	****园区
苏虹西路9号3栋

建设项目基本信息

项目名称：项目代码：项目类型：建设性质：行业类别（分类管理名录）：行业类别（国民经济代码）：工程性质：建设地点：中心坐标： ****机关：环评文件类型：环评批复时间：环评审批文号：本工程排污许可证编号：排污许可批准时间：项目实际总投资(万元)：项目实际环保投资(万元)：运营单位名称：运营单位组织机构代码：验收监测(调查)报告编制机构名称：验收监测(调查)报告编制机构代码：验收监测单位：验收监测单位组织机构代码：竣工时间：调试起始时间：调试结束时间：验收报告公开起始时间：验收报告公开结束时间：验收报告公开形式：验收报告公开载体：

****建设实验室项目	****

2021版本:098-专业实验室、****基地	M7340-M7340-医学研究和试验发展
	****园区苏虹西路9号3栋
经度:120.68351 纬度: 31.33201	****环境局
	2023-06-13
H****0149	**0500MB1K**04001X
2025-10-21	2000
22	****
****0500MB1K429804	市环科**公司
****0508MA1MBCGX3T	迈**公司
913********668839K	2025-10-01

2025-12-09	2026-01-06
	http://szhjrx.****.net/jghb/hbysgs/2087.html#

2、工程变动信息

项目性质

环评文件及批复要求：实际建设情况：变动情况及原因：是否属于重大变动：是否重新报批环境影响报告书(表)文件：

**	**
与环评一致

规模

环评文件及批复要求：实际建设情况：变动情况及原因：是否属于重大变动：是否重新报批环境影响报告书(表)文件：

生殖类实验（生殖类器官/细胞培养）100批/年，生殖类实验（试剂盒研发）20批/年，生殖类实验（干细胞制剂研发及制备）40批/年，生殖类实验（生殖类PCR实验室检测）20批/年，类脑类实验（脑类器官培养）20批/年，类脑类实验（分子生物学等各类实验）2000批/年，肿瘤类实验（捕获panel研发）100批/年，肿瘤类实验（肿瘤类建库检测）100批/年，代谢组学类实验（生物样本分析）25批/年。	生殖类实验（生殖类器官/细胞培养）100批/年，生殖类实验（试剂盒研发）20批/年，生殖类实验（干细胞制剂研发及制备）40批/年，生殖类实验（生殖类PCR实验室检测）20批/年，类脑类实验（脑类器官培养）20批/年，类脑类实验（分子生物学等各类实验）2000批/年，肿瘤类实验（捕获panel研发）100批/年，肿瘤类实验（肿瘤类建库检测）100批/年，代谢组学类实验（生物样本分析）25批/年。
与环评一致

生产工艺

环评文件及批复要求：实际建设情况：变动情况及原因：是否属于重大变动：是否重新报批环境影响报告书(表)文件：

****实验室项目，不涉及生产，典型实验方向主要为生殖类实验、类脑类实验、肿瘤类实验和代谢组学类实验。 1、生殖类实验（1）生殖类器官培养实验 ①类器官/细胞培养临床睾丸样本/细胞使用生殖类缓冲液清洗，在体式镜下分离成块状组织/单细胞。将琼脂糖凝胶用微波炉高温熔化与灭菌处理，用培养皿装载并冷却至室温后，切成小块，加入组织/细胞培养液。在组织/细胞培养液中加入血清替代物、骨形态生长因子、干细胞生长因子、激活素、睾酮、促卵泡生成素、垂体提取物。同时可以将细胞重聚为组织加入组织/细胞培养液，在CO2培养箱中培养。该实验过程产生实验废液L1-1；废弃样本S1-1；废实验耗材S1-2。 ②固定/切片将取下的组织块/细胞放置在4%多聚甲醛中固定，使用酒精和二甲苯进行组织脱水。转移到包埋框中浸蜡，使用包埋机包埋后进行石蜡切片，后使用展片机展片。石蜡切片加入二甲苯放入烤箱，使用酒精进行水化，超纯水清洗；使用苏木素染色，然后使用超纯水及HCL分别清洗；后使用伊红染色，染色结束使用酒精及二甲苯脱水，后使用超纯水清洗封片。该实验过程产生有机废气G1-1；实验废液L1-1；废弃样本S1-1；废实验耗材S1-2。 ③染色鉴定配制修复液（超纯水、柠檬酸、柠檬酸钠）、抗体。使用二甲苯和酒精对石蜡切片进行脱蜡、脱水，加入修复液。将切片放置于微波炉中加热，冷却至室温，放置于牛血清白蛋白中封闭2小时。加抗体孵育，染核后使用甘油封片拍照。该实验过程产生有机废气G1-1；实验废液L1-1；废弃样本S1-1；废实验耗材S1-2 ④流式细胞分选纯化组织和细胞在磷酸盐缓冲液中清洗，加入Ⅳ型胶原酶和胰蛋白酶进行消化，后加入等体积组织培养液终止消化。离心去除上清液，加入组织培养液，后加入烟酸己可碱染色后，利用流式细胞仪分选获得细胞，该细胞即为样品。该实验过程产生有机废气G1-1；实验废液L1-1；废弃样本S1-1；废实验耗材S1-2。（2）生殖类试剂盒研发 ①工作液配制将外购引物溶液、探针溶液按照工作液浓度要求，采用超纯水进行配制待用。 ②预混液配制将工作液与探针溶液等成分按照既定配方进行预混液配制，预混液需充分溶解，无杂质沉淀。 ③中间品质控预混液配制完成后，将使用超纯水稀释至合适浓度的质控品（合成质粒或基因组DNA），按照质检要求通过TAE电泳液进行凝胶电泳，采用凝胶成像仪进行成像，需满足质检标准。该过程产生实验废液L1-1；废实验耗材S1-2；不合格品S1-3。 ④分装及包装按照包装规定体积及用量进行试剂分装，由于是微量操作，分装过程采用微量移液器人工进行分装，分装完毕后进行包装。 ⑤成品质控成品包装完成后，进行上机检验（使用荧光定量PCR仪、荧光定量仪、生物分析仪），实验结果需满足质检合格标准，合格的试剂盒样品入库备用。该过程产生实验废液L1-1；废实验耗材S1-2；不合格品S1-3。（3）生殖类PCR实验室检测生殖类PCR实验室检测主要为高通量测序。高通量测序主要涉及样品准备、建库环节、捕获环节及上机检测，仪器为测序仪。 ①样品准备根据实验要求，将尿样保存液、病毒保存液等样本内的核酸物质通过提取方法分离出来。使用DNA提取试剂盒进行DNA提取（试剂盒提供提取所需的液体试剂和生物酶）；后用注射水洗脱DNA，放于-20℃保存、备用。接着将DNA样本装在仪器指定的样品管中进行打断，以满足下一步建库需求。此过程将产生实验废液L1-1；废弃样本S1-1；废实验耗材S1-2。 ②建库环节 DNA建库使用的是DNA建库试剂盒（试剂盒提供提取所需的液体试剂和生物酶）。试剂盒对破碎后的样本进行磁珠富集清洗后，将核苷酸或核苷酸片段加到目的样本末端，完成基因文库制备。此过程将产生实验废液L1-1；废实验耗材S1-2。 ③捕获环节将建库处理后的DNA通过封闭液、捕获探针、捕获磁珠等进行纯化完成目标区域文库捕获。并使用定量分析仪器、流式细胞分析对文库进行质量控制，检测文库浓度和文库片段大小，以确保满足下一步实验要求。此过程将产生实验废液L1-1；废实验耗材S1-2。 ④上机检测使用利用有关设备对处理后的样品进行检测分析，高通量测序需使用测序试剂，上机前和上机后分别采用清洗液对仪器进行清洗。此过程将产生实验废液L1-1；废实验耗材S1-2。 ⑤结果对实验得出的检测数据进行详细记录，进行计算分析，得出结果。此过程无污染物产生。（4）干细胞制剂研发及制备 ①采样检验对原料正式组织分离前，须对样品进行无菌抽检，同时采集一定质量的样品按相关要求送至样品库进行备份保存，保存有效期为5年（当干细胞制备实验成功后，备份的样品作为医疗废物处理）。此过程将产生废实验耗材S1-2；废弃样本S1-1。 ②组织培养（细胞分离）用75%乙醇对眼科剪进行消毒，在专用的生物安全柜中，使用眼科剪将羊膜剪成适当大小的组织小块，置于离心管中，加入胰酶分离组织为单细胞，使用离心机离心后铺板，待细胞长出后用胰酶消化，获得原代间充质干细胞株（P0）。此过程将产生有机废气G1-1；废弃样本S1-1；实验废液L1-1；废实验耗材S1-2。 ③扩增培养将消化后的原代间充质干细胞株重新种植于培养瓶，加入培养液（培养基和超纯水配制），放入5%二氧化碳、37℃培养箱中培养。细胞达到一定生长密度后，消化、收获干细胞。培养过程使用显微镜等对培养细胞进行观察，确保细胞生长状态良好。如生长不正常的细胞经灭活后废弃，培养实验改进条件重新实验。此过程将产生实验废液L1-1；废实验耗材S1-2。 ④质量检验取部分培养的干细胞进行病原微生物、内毒素的检测，检测结果需1周左右。其中病原微生物检验是单独取一部分样品进行培养液（培养基和超纯水配制）培养，在培养过程中，若能够长出致病菌则为不合格品，反之则为合格品；内毒素检测使用内毒素检测试剂盒按照说明取样检测，根据说明判断样品是否合格；用全自动细菌培养仪检测有无细菌、真菌污染；用流式细胞仪检测干细胞表面标志CD73、CD105等阳性表达；用显微镜观察细胞形态是否为长梭形、贴壁生长及细胞复苏后活率≥80%。另取部分干细胞继代培养至工作代次（P5），培养过程中每一代次均进行病菌、内毒素检测，在P5代时使用分析型流式细胞仪进行细胞免疫活性检测，使用酶标仪进行分泌细胞因子浓度检测。若检测不合格，则将全批次样品废弃。此过程将产生实验废液L1-1；不合格品S1-3；废实验耗材S1-2。 ⑤冷冻储存质检取样后，合格的干细胞采用冻存管收集，加入冻存液，分装入冻存管，然后用程控降温仪降温后置于“待检测结果”液氮罐中储藏。检测结果合格后，根据细胞类别及储存期限分类存放于细胞储存罐中，保存期限一般为1年～5年。此过程将产生废实验耗材S1-2。 ⑥性能验证及成果转化根据实验标准操作规程，在干细胞达到相应的保存期后，取出进行细胞复苏，或使用Q-PCR扩增仪扩增，检测细胞形态及复苏后活率进行性能验证，如达到相关要求，按相关手续进行研发成果转化。如不符合相关要求，则改进工艺，重新研发，研发实验阶段其储存的相应干细胞废弃。此过程将产生实验废液L1-1；不合格品S1-3；废实验耗材S1-2。 2、类脑类实验（1）脑类器官培养实验 ①消化人多能干细胞在孔板中大约长至60%-80%密度时，用预热的消化酶37℃消化，显微镜下观察可见克隆明显卷边，而后吸弃消化酶，沿壁加入预热的DMEM/F12培养液轻摇后吸弃。该过程产生实验废液L2-1。 ②自然沉降加入DMEM/F12培养液，用移液枪将克隆整块吹起，保持克隆的完整性，进一步使用移液管将其收集至离心管中，待其自然沉降5-10分钟后，吸弃上清。该过程产生实验废液L2-1、废实验耗材S2-1。 ③悬浮培养1 将收集的克隆加入Essential 8培养液及NIM培养液将其重悬，转移至培养瓶中，在培养箱进行悬浮培养，此即拟胚体，此后每天半换液。该过程产生实验废液L2-1。 ④3D包埋悬浮培养至第6-7天时，取出现放射状的假复层上皮细胞样结构的拟胚体进行3D包埋。将拟胚体用移液枪单个吸出，转至事先用紫外消毒处理过的封口膜上，吸干培养液，用基质胶分别加至单个拟胚体上，并用枪头稍微晃动使每个拟胚体分别包被于基质胶中，并置于培养箱中使其凝固10 min。随后将包被拟胚体的基质胶胶吹下，将拟胚体用移液管转至细胞培养皿中。该过程产生实验废液L2-1；废实验耗材S2-1。 ⑤悬浮培养2 在装有拟胚体的细胞培养皿中加入NIM培养液进行悬浮培养。定期换液，每日观察细胞并轻晃培养皿，保持类器官的悬浮状态，培养完成即为成品。该过程产生实验废液L2-1。（2）类脑类分子生物学实验类脑类分子生物学实验主要包括类器官切片与免疫荧光染色实验、免疫印迹实验、实时定量聚合酶链(PCR)反应实验等，对脑类器官培养实验成品进行分析鉴定。 A、类器官切片与免疫荧光染色实验 ①固定将脑类器官培养实验制成的类脑器官收集于离心管内，并加入4%多聚甲醛对其进行固定，4℃放置。 ②脱水使用PBS缓冲片及超纯水配制磷酸盐缓冲液，使用磷酸盐缓冲液对类器官清洗后，加入蔗糖溶液进行脱水处理，待第二天类器官沉于底部后，置换为蔗糖溶液进行进一步的脱水处理。该实验过程产生实验废液L1-1。 ③切片将脱水后的类器官用O.C.T.包埋剂包裹，再利用冷冻切片机将其制备成切片，放置于-20℃保存。 ④免疫荧光染色使用PBS缓冲片及超纯水配制磷酸盐缓冲液，将切片用磷酸盐缓冲液漂洗之后，用封闭稀释液（曲拉通X-100、驴血清）对其处理。后加入抗体4℃孵育过夜，次日，用磷酸盐缓冲漂洗后，将切片置于抗体中，室温孵育。后使用磷酸盐缓冲液漂洗后，吸弃磷酸盐缓冲液，加入封片剂，封片并长期保存。该实验过程产生实验废液L2-1。 ⑤结论实验结束，记录实验结果。 B、免疫印迹实验 ①蛋白提取吸取脑类器官培养实验制成的类脑器官于离心管内，加入适量细胞裂解液。注射器将其充分裂解后，进行冰浴，然后进行离心。取上清，经高温变性后冻于-40℃保存备用。该实验过程产生废实验耗材S2-1；损伤性废物S2-2。 ②SDS-PAGE电泳将预制凝胶固定于电泳槽中，加入适量电泳液后加入上一步提取的蛋白。 ③转膜将硝酸纤维素膜提前浸泡于转膜液中浸润。电泳结束后，固定好转膜夹。放置过程中应当尽量排除气泡。最后将转膜夹置于备有转膜液的转膜槽内，得到目标条带。该实验过程产生实验废液L2-1。 ④抗体孵育首先将目标条带置于脱脂奶粉中室温封闭。之后加入抗体，4℃过夜孵育。孵育结束后，TBST缓冲液漂洗。再加入同源抗体，室温封闭。结束后，使用TBST缓冲液漂洗。最后，加入曝光液，经化学发光凝胶成像系统处理后获得目的条带，长期冷冻保存。该过程产生实验废液L2-1；废实验耗材S2-1。 ⑤结论实验结束，记录实验结果。 C、实时定量聚合酶链(PCR)反应实验 ①RNA提取收集脑类器官培养实验制成的类脑器官于样品管中，离心机离心，去上清。加入苯酚，用注射器反复吹打细胞直至完全裂解，室温静置。进行离心（4℃），离心后见分层，两层中间可见沉淀，取上层水相至新的样品管中，加入等体积异丙醇，上下颠倒混匀；再次离心（4℃），此时RNA会以白色沉淀形式析出。弃上清，用蒸馏水配制的乙醇洗涤后离心（4℃）；弃上清，将样品管反扣于灭菌纱布上，置于超净工作台中通风、晾干RNA，以去除残余的有机溶剂。随后，加蒸馏水溶解，取部分样品，用超微量紫外可见光分光光度计测定RNA浓度及OD260/280值。完成RNA的提取，-80℃保存。该过程产生有机废气G2-1；实验废液L2-1；废实验耗材S2-1；损伤性废物S2-2。 ②RNA反转录成cDNA 使用反转录试剂盒，与RNA配制成RT反应液（全程需在冰上操作）。轻柔均匀后进行反转录反应（37℃），后进行反转录酶的失活反应（85℃），将RNA反转录成cDNA。反应结束后，用去离子水将以上cDNA稀释10倍，保存在-40℃或进行后续的qPCR实验。该过程产生废实验耗材S2-1。 ③实时荧光定量PCR 体系配制完成后，放入PCR仪中进行扩增，扩增程序为：预变性（95℃）、变性（95℃）、退火（55-60℃）、延伸（72℃）、溶解曲线阶段（60-95℃）。样品长期冷冻保存。 ④结论实验结束，记录实验结果。 3、肿瘤类实验（1）肿瘤类建库检测 ①样本片段化将通过DNA提取试剂盒提好的DNA样本使用DNA宽范围定量试剂盒定量确定浓度，使用超微量紫外可见光分光光度计进行纯度测定，然后使用去离子水稀释，加入DNA建库试剂盒中的片段化酶及其缓冲液的混合物，在基因扩增仪上进行片段化反应。该过程产生废实验耗材S3-1。 ②末端修复和加A尾上一步的反应结束后使用DNA建库试剂盒中的末端修复加A尾混合液，混匀后瞬间离心，在基因扩增仪运行末端修复加A尾反应。 ③接头连接上一步反应结束后使用末端修复加A尾产物、引物溶液、去离子水与DNA建库试剂盒中酶配制混合液，混匀后在基因扩增仪上进行连接反应。 ④连接后纯化将DNA纯化磁珠加入上一步产物中，通过枪头吹打彻底混匀孵育，并置于磁力架上至液体澄清，吸取上清并弃上清液（附着于一次性枪头内）。使用80%乙醇洗脱两次后待磁珠晾干微裂后加入洗脱液重悬、孵育、吸取上清液产物。该过程产生有机废气G3-1、废实验耗材S3-1。 ⑤文库扩增上一步结束后的产物与酶、双端引物配制混合液，在基因扩增仪上进行扩增反应。 ⑥文库纯化将DNA纯化磁珠加入产物中，通过枪头吹打彻底混匀孵育，并置于磁力架上至液体澄清，吸取上清并弃上清液（附着于一次性枪头内）。使用80%乙醇洗脱两次后待磁珠晾干微裂后加入洗脱液重悬、孵育、吸取上清液产物。此时是基因组文库，长期保存，也可根据需求进行片段筛选。该过程产生有机废气G3-1、废实验耗材S3-1。 ⑦文库质检对于以上制备好的文库使用DNA高灵敏定量试剂盒在Qubit4仪器上进行定量，并使用Qsep片段分析仪进行片段长度检测。该过程产生废实验耗材S3-1。 ⑧筛选目的片段使用精密电子天平称量适量琼脂糖配胶后，在TAE电泳液中对文库进行跑胶，根据marker质控品割取合适目标片段。使用DNA胶纯化试剂盒对割胶产物进行回收。该过程产生废实验耗材S3-1。 ⑨上机测序选取部分基因组文库，上机测序外协，记录实验结果，并进行分析。（2）捕获panel研发 ①封闭液混合物配制及文库变性取建库检测实验过程中制备的全基因组文库，加入封闭液混匀，使用基因扩增仪进行孵育。然后取捕获探针转移到孵育后的上一步的混合液中吹打混匀产物孵育后备用。 ②捕获磁珠准备将链霉卵白素捕获磁珠混匀后加入PCR管内，再加入DNA纯化磁珠，混合均匀涡旋，放置磁力架上直至上液澄清，吸取上清液弃掉（附着于一次性枪头内）再重悬。该过程产生废实验耗材S3-1。 ③非特性序列室温洗脱、热洗脱吸取步骤1中的产物加入上一步的捕获磁珠重悬液，混匀孵育，磁力架上吸取上清液弃掉。用洗涤液将磁珠吹打重悬，混匀孵育，磁力架上吸取上清液弃掉（附着于一次性枪头内）。用洗涤液重悬上一步的磁珠，涡旋孵育，磁力架上吸取上清液弃掉。后用去离子水吹打混匀磁珠。该过程产生废实验耗材S3-1。 ④文库扩增富集将DNA建库试剂盒中的酶和引物溶液室温溶化后混匀后瞬间离心，使用酶、引物溶液、捕获产物（含磁珠）配制混合液。后在基因扩增仪上进行文库富集。富集完成后入库长期储存。 4、代谢组学类实验 ①标准曲线和质控样品的准备在室温下精确量取超纯水到试剂盒（标准物质冻干粉/质控品冻干粉）试剂瓶中，漩涡混匀至冻干粉完全溶解后备用（如瓶塞上存在粉末，请加塞后上下颠倒数次至冻干粉溶解），瓶塞不得混用。 ②内标溶液的准备取试剂盒中内标液，在室温下复温5分钟，开瓶直接使用。 ③样本前处理精密移取甲醇于96孔过滤板中，精密加入内标液，精密加入标准曲线和质控样品到样本中。置于96孔板震荡器，以涡旋10分钟。在96孔过滤板下方放置96孔接收板，离心5分钟；取下96孔接收板，封板后使用液相色谱串联质谱仪方法进行检测。该过程产生有机废气G4-1；废实验耗材S4-1；废弃样本S4-2。 ④样品检测取处理好的标准曲线和质控样品、生物样本，注入液质联用仪进行检测（仪器配套使用甲醇、乙腈）。该过程产生有机废气G4-1；废实验耗材S4-1；实验废液L4-1。 ⑤结论记录检测结果，出具检测报告。该过程产生实验废液L4-1。 5、灭活工序实验结束后，实验过程产生的实验废液、清洗废液、废弃样本、不合格品、损伤性废物及废实验耗材均需进行灭活处理。 ①灭菌锅高压蒸汽灭菌废弃样本、不合格品、损伤性废物及废实验耗材均使用灭菌锅进行高压蒸汽灭活处置，灭活后统一收集作危废处置。蒸汽灭活用水损耗后补充不外排。 ②化学灭活实验过程产生的实验废液、清洗废液含有细菌、细胞碎片等，需经灭活后统一收集作危废处置。实验废液、清洗废液倒入废液收集桶—加强碱NaOH将pH调至11~12.0达到灭活目的。 A、大多数细菌的最适环境pH值在6.0-8.0之间，可生存pH范围在4.0-10.0之间，在pH值为11~12.0以上时，微生物的物质平衡被打破，无法维持其正常的生命活动，达到杀菌的目的。 B、pH的剧烈变化（强碱）会使膜上的通道蛋白、转运蛋白以及信号通路蛋白等组分失去正常功能，导致细胞失去了选择性透过功能，细胞内外钠钾离子失衡。强碱环境，会使碱性蛋白质的功能基团中和并被降解，发生不可逆的破坏，达到灭活的目的。	****实验室项目，不涉及生产，典型实验方向主要为生殖类实验、类脑类实验、肿瘤类实验和代谢组学类实验。 1、生殖类实验（1）生殖类器官培养实验 ①类器官/细胞培养临床睾丸样本/细胞使用生殖类缓冲液清洗，在体式镜下分离成块状组织/单细胞。将琼脂糖凝胶用微波炉高温熔化与灭菌处理，用培养皿装载并冷却至室温后，切成小块，加入组织/细胞培养液。在组织/细胞培养液中加入血清替代物、骨形态生长因子、干细胞生长因子、激活素、睾酮、促卵泡生成素、垂体提取物。同时可以将细胞重聚为组织加入组织/细胞培养液，在CO2培养箱中培养。该实验过程产生实验废液L1-1；废弃样本S1-1；废实验耗材S1-2。 ②固定/切片将取下的组织块/细胞放置在4%多聚甲醛中固定，使用酒精和二甲苯进行组织脱水。转移到包埋框中浸蜡，使用包埋机包埋后进行石蜡切片，后使用展片机展片。石蜡切片加入二甲苯放入烤箱，使用酒精进行水化，超纯水清洗；使用苏木素染色，然后使用超纯水及HCL分别清洗；后使用伊红染色，染色结束使用酒精及二甲苯脱水，后使用超纯水清洗封片。该实验过程产生有机废气G1-1；实验废液L1-1；废弃样本S1-1；废实验耗材S1-2。 ③染色鉴定配制修复液（超纯水、柠檬酸、柠檬酸钠）、抗体。使用二甲苯和酒精对石蜡切片进行脱蜡、脱水，加入修复液。将切片放置于微波炉中加热，冷却至室温，放置于牛血清白蛋白中封闭2小时。加抗体孵育，染核后使用甘油封片拍照。该实验过程产生有机废气G1-1；实验废液L1-1；废弃样本S1-1；废实验耗材S1-2 ④流式细胞分选纯化组织和细胞在磷酸盐缓冲液中清洗，加入Ⅳ型胶原酶和胰蛋白酶进行消化，后加入等体积组织培养液终止消化。离心去除上清液，加入组织培养液，后加入烟酸己可碱染色后，利用流式细胞仪分选获得细胞，该细胞即为样品。该实验过程产生有机废气G1-1；实验废液L1-1；废弃样本S1-1；废实验耗材S1-2。（2）生殖类试剂盒研发 ①工作液配制将外购引物溶液、探针溶液按照工作液浓度要求，采用超纯水进行配制待用。 ②预混液配制将工作液与探针溶液等成分按照既定配方进行预混液配制，预混液需充分溶解，无杂质沉淀。 ③中间品质控预混液配制完成后，将使用超纯水稀释至合适浓度的质控品（合成质粒或基因组DNA），按照质检要求通过TAE电泳液进行凝胶电泳，采用凝胶成像仪进行成像，需满足质检标准。该过程产生实验废液L1-1；废实验耗材S1-2；不合格品S1-3。 ④分装及包装按照包装规定体积及用量进行试剂分装，由于是微量操作，分装过程采用微量移液器人工进行分装，分装完毕后进行包装。 ⑤成品质控成品包装完成后，进行上机检验（使用荧光定量PCR仪、荧光定量仪、生物分析仪），实验结果需满足质检合格标准，合格的试剂盒样品入库备用。该过程产生实验废液L1-1；废实验耗材S1-2；不合格品S1-3。（3）生殖类PCR实验室检测生殖类PCR实验室检测主要为高通量测序。高通量测序主要涉及样品准备、建库环节、捕获环节及上机检测，仪器为测序仪。 ①样品准备根据实验要求，将尿样保存液、病毒保存液等样本内的核酸物质通过提取方法分离出来。使用DNA提取试剂盒进行DNA提取（试剂盒提供提取所需的液体试剂和生物酶）；后用注射水洗脱DNA，放于-20℃保存、备用。接着将DNA样本装在仪器指定的样品管中进行打断，以满足下一步建库需求。此过程将产生实验废液L1-1；废弃样本S1-1；废实验耗材S1-2。 ②建库环节 DNA建库使用的是DNA建库试剂盒（试剂盒提供提取所需的液体试剂和生物酶）。试剂盒对破碎后的样本进行磁珠富集清洗后，将核苷酸或核苷酸片段加到目的样本末端，完成基因文库制备。此过程将产生实验废液L1-1；废实验耗材S1-2。 ③捕获环节将建库处理后的DNA通过封闭液、捕获探针、捕获磁珠等进行纯化完成目标区域文库捕获。并使用定量分析仪器、流式细胞分析对文库进行质量控制，检测文库浓度和文库片段大小，以确保满足下一步实验要求。此过程将产生实验废液L1-1；废实验耗材S1-2。 ④上机检测使用利用有关设备对处理后的样品进行检测分析，高通量测序需使用测序试剂，上机前和上机后分别采用清洗液对仪器进行清洗。此过程将产生实验废液L1-1；废实验耗材S1-2。 ⑤结果对实验得出的检测数据进行详细记录，进行计算分析，得出结果。此过程无污染物产生。（4）干细胞制剂研发及制备 ①采样检验对原料正式组织分离前，须对样品进行无菌抽检，同时采集一定质量的样品按相关要求送至样品库进行备份保存，保存有效期为5年（当干细胞制备实验成功后，备份的样品作为医疗废物处理）。此过程将产生废实验耗材S1-2；废弃样本S1-1。 ②组织培养（细胞分离）用75%乙醇对眼科剪进行消毒，在专用的生物安全柜中，使用眼科剪将羊膜剪成适当大小的组织小块，置于离心管中，加入胰酶分离组织为单细胞，使用离心机离心后铺板，待细胞长出后用胰酶消化，获得原代间充质干细胞株（P0）。此过程将产生有机废气G1-1；废弃样本S1-1；实验废液L1-1；废实验耗材S1-2。 ③扩增培养将消化后的原代间充质干细胞株重新种植于培养瓶，加入培养液（培养基和超纯水配制），放入5%二氧化碳、37℃培养箱中培养。细胞达到一定生长密度后，消化、收获干细胞。培养过程使用显微镜等对培养细胞进行观察，确保细胞生长状态良好。如生长不正常的细胞经灭活后废弃，培养实验改进条件重新实验。此过程将产生实验废液L1-1；废实验耗材S1-2。 ④质量检验取部分培养的干细胞进行病原微生物、内毒素的检测，检测结果需1周左右。其中病原微生物检验是单独取一部分样品进行培养液（培养基和超纯水配制）培养，在培养过程中，若能够长出致病菌则为不合格品，反之则为合格品；内毒素检测使用内毒素检测试剂盒按照说明取样检测，根据说明判断样品是否合格；用全自动细菌培养仪检测有无细菌、真菌污染；用流式细胞仪检测干细胞表面标志CD73、CD105等阳性表达；用显微镜观察细胞形态是否为长梭形、贴壁生长及细胞复苏后活率≥80%。另取部分干细胞继代培养至工作代次（P5），培养过程中每一代次均进行病菌、内毒素检测，在P5代时使用分析型流式细胞仪进行细胞免疫活性检测，使用酶标仪进行分泌细胞因子浓度检测。若检测不合格，则将全批次样品废弃。此过程将产生实验废液L1-1；不合格品S1-3；废实验耗材S1-2。 ⑤冷冻储存质检取样后，合格的干细胞采用冻存管收集，加入冻存液，分装入冻存管，然后用程控降温仪降温后置于“待检测结果”液氮罐中储藏。检测结果合格后，根据细胞类别及储存期限分类存放于细胞储存罐中，保存期限一般为1年～5年。此过程将产生废实验耗材S1-2。 ⑥性能验证及成果转化根据实验标准操作规程，在干细胞达到相应的保存期后，取出进行细胞复苏，或使用Q-PCR扩增仪扩增，检测细胞形态及复苏后活率进行性能验证，如达到相关要求，按相关手续进行研发成果转化。如不符合相关要求，则改进工艺，重新研发，研发实验阶段其储存的相应干细胞废弃。此过程将产生实验废液L1-1；不合格品S1-3；废实验耗材S1-2。 2、类脑类实验（1）脑类器官培养实验 ①消化人多能干细胞在孔板中大约长至60%-80%密度时，用预热的消化酶37℃消化，显微镜下观察可见克隆明显卷边，而后吸弃消化酶，沿壁加入预热的DMEM/F12培养液轻摇后吸弃。该过程产生实验废液L2-1。 ②自然沉降加入DMEM/F12培养液，用移液枪将克隆整块吹起，保持克隆的完整性，进一步使用移液管将其收集至离心管中，待其自然沉降5-10分钟后，吸弃上清。该过程产生实验废液L2-1、废实验耗材S2-1。 ③悬浮培养1 将收集的克隆加入Essential 8培养液及NIM培养液将其重悬，转移至培养瓶中，在培养箱进行悬浮培养，此即拟胚体，此后每天半换液。该过程产生实验废液L2-1。 ④3D包埋悬浮培养至第6-7天时，取出现放射状的假复层上皮细胞样结构的拟胚体进行3D包埋。将拟胚体用移液枪单个吸出，转至事先用紫外消毒处理过的封口膜上，吸干培养液，用基质胶分别加至单个拟胚体上，并用枪头稍微晃动使每个拟胚体分别包被于基质胶中，并置于培养箱中使其凝固10 min。随后将包被拟胚体的基质胶胶吹下，将拟胚体用移液管转至细胞培养皿中。该过程产生实验废液L2-1；废实验耗材S2-1。 ⑤悬浮培养2 在装有拟胚体的细胞培养皿中加入NIM培养液进行悬浮培养。定期换液，每日观察细胞并轻晃培养皿，保持类器官的悬浮状态，培养完成即为成品。该过程产生实验废液L2-1。（2）类脑类分子生物学实验类脑类分子生物学实验主要包括类器官切片与免疫荧光染色实验、免疫印迹实验、实时定量聚合酶链(PCR)反应实验等，对脑类器官培养实验成品进行分析鉴定。 A、类器官切片与免疫荧光染色实验 ①固定将脑类器官培养实验制成的类脑器官收集于离心管内，并加入4%多聚甲醛对其进行固定，4℃放置。 ②脱水使用PBS缓冲片及超纯水配制磷酸盐缓冲液，使用磷酸盐缓冲液对类器官清洗后，加入蔗糖溶液进行脱水处理，待第二天类器官沉于底部后，置换为蔗糖溶液进行进一步的脱水处理。该实验过程产生实验废液L1-1。 ③切片将脱水后的类器官用O.C.T.包埋剂包裹，再利用冷冻切片机将其制备成切片，放置于-20℃保存。 ④免疫荧光染色使用PBS缓冲片及超纯水配制磷酸盐缓冲液，将切片用磷酸盐缓冲液漂洗之后，用封闭稀释液（曲拉通X-100、驴血清）对其处理。后加入抗体4℃孵育过夜，次日，用磷酸盐缓冲漂洗后，将切片置于抗体中，室温孵育。后使用磷酸盐缓冲液漂洗后，吸弃磷酸盐缓冲液，加入封片剂，封片并长期保存。该实验过程产生实验废液L2-1。 ⑤结论实验结束，记录实验结果。 B、免疫印迹实验 ①蛋白提取吸取脑类器官培养实验制成的类脑器官于离心管内，加入适量细胞裂解液。注射器将其充分裂解后，进行冰浴，然后进行离心。取上清，经高温变性后冻于-40℃保存备用。该实验过程产生废实验耗材S2-1；损伤性废物S2-2。 ②SDS-PAGE电泳将预制凝胶固定于电泳槽中，加入适量电泳液后加入上一步提取的蛋白。 ③转膜将硝酸纤维素膜提前浸泡于转膜液中浸润。电泳结束后，固定好转膜夹。放置过程中应当尽量排除气泡。最后将转膜夹置于备有转膜液的转膜槽内，得到目标条带。该实验过程产生实验废液L2-1。 ④抗体孵育首先将目标条带置于脱脂奶粉中室温封闭。之后加入抗体，4℃过夜孵育。孵育结束后，TBST缓冲液漂洗。再加入同源抗体，室温封闭。结束后，使用TBST缓冲液漂洗。最后，加入曝光液，经化学发光凝胶成像系统处理后获得目的条带，长期冷冻保存。该过程产生实验废液L2-1；废实验耗材S2-1。 ⑤结论实验结束，记录实验结果。 C、实时定量聚合酶链(PCR)反应实验 ①RNA提取收集脑类器官培养实验制成的类脑器官于样品管中，离心机离心，去上清。加入苯酚，用注射器反复吹打细胞直至完全裂解，室温静置。进行离心（4℃），离心后见分层，两层中间可见沉淀，取上层水相至新的样品管中，加入等体积异丙醇，上下颠倒混匀；再次离心（4℃），此时RNA会以白色沉淀形式析出。弃上清，用蒸馏水配制的乙醇洗涤后离心（4℃）；弃上清，将样品管反扣于灭菌纱布上，置于超净工作台中通风、晾干RNA，以去除残余的有机溶剂。随后，加蒸馏水溶解，取部分样品，用超微量紫外可见光分光光度计测定RNA浓度及OD260/280值。完成RNA的提取，-80℃保存。该过程产生有机废气G2-1；实验废液L2-1；废实验耗材S2-1；损伤性废物S2-2。 ②RNA反转录成cDNA 使用反转录试剂盒，与RNA配制成RT反应液（全程需在冰上操作）。轻柔均匀后进行反转录反应（37℃），后进行反转录酶的失活反应（85℃），将RNA反转录成cDNA。反应结束后，用去离子水将以上cDNA稀释10倍，保存在-40℃或进行后续的qPCR实验。该过程产生废实验耗材S2-1。 ③实时荧光定量PCR 体系配制完成后，放入PCR仪中进行扩增，扩增程序为：预变性（95℃）、变性（95℃）、退火（55-60℃）、延伸（72℃）、溶解曲线阶段（60-95℃）。样品长期冷冻保存。 ④结论实验结束，记录实验结果。 3、肿瘤类实验（1）肿瘤类建库检测 ①样本片段化将通过DNA提取试剂盒提好的DNA样本使用DNA宽范围定量试剂盒定量确定浓度，使用超微量紫外可见光分光光度计进行纯度测定，然后使用去离子水稀释，加入DNA建库试剂盒中的片段化酶及其缓冲液的混合物，在基因扩增仪上进行片段化反应。该过程产生废实验耗材S3-1。 ②末端修复和加A尾上一步的反应结束后使用DNA建库试剂盒中的末端修复加A尾混合液，混匀后瞬间离心，在基因扩增仪运行末端修复加A尾反应。 ③接头连接上一步反应结束后使用末端修复加A尾产物、引物溶液、去离子水与DNA建库试剂盒中酶配制混合液，混匀后在基因扩增仪上进行连接反应。 ④连接后纯化将DNA纯化磁珠加入上一步产物中，通过枪头吹打彻底混匀孵育，并置于磁力架上至液体澄清，吸取上清并弃上清液（附着于一次性枪头内）。使用80%乙醇洗脱两次后待磁珠晾干微裂后加入洗脱液重悬、孵育、吸取上清液产物。该过程产生有机废气G3-1、废实验耗材S3-1。 ⑤文库扩增上一步结束后的产物与酶、双端引物配制混合液，在基因扩增仪上进行扩增反应。 ⑥文库纯化将DNA纯化磁珠加入产物中，通过枪头吹打彻底混匀孵育，并置于磁力架上至液体澄清，吸取上清并弃上清液（附着于一次性枪头内）。使用80%乙醇洗脱两次后待磁珠晾干微裂后加入洗脱液重悬、孵育、吸取上清液产物。此时是基因组文库，长期保存，也可根据需求进行片段筛选。该过程产生有机废气G3-1、废实验耗材S3-1。 ⑦文库质检对于以上制备好的文库使用DNA高灵敏定量试剂盒在Qubit4仪器上进行定量，并使用Qsep片段分析仪进行片段长度检测。该过程产生废实验耗材S3-1。 ⑧筛选目的片段使用精密电子天平称量适量琼脂糖配胶后，在TAE电泳液中对文库进行跑胶，根据marker质控品割取合适目标片段。使用DNA胶纯化试剂盒对割胶产物进行回收。该过程产生废实验耗材S3-1。 ⑨上机测序选取部分基因组文库，上机测序外协，记录实验结果，并进行分析。（2）捕获panel研发 ①封闭液混合物配制及文库变性取建库检测实验过程中制备的全基因组文库，加入封闭液混匀，使用基因扩增仪进行孵育。然后取捕获探针转移到孵育后的上一步的混合液中吹打混匀产物孵育后备用。 ②捕获磁珠准备将链霉卵白素捕获磁珠混匀后加入PCR管内，再加入DNA纯化磁珠，混合均匀涡旋，放置磁力架上直至上液澄清，吸取上清液弃掉（附着于一次性枪头内）再重悬。该过程产生废实验耗材S3-1。 ③非特性序列室温洗脱、热洗脱吸取步骤1中的产物加入上一步的捕获磁珠重悬液，混匀孵育，磁力架上吸取上清液弃掉。用洗涤液将磁珠吹打重悬，混匀孵育，磁力架上吸取上清液弃掉（附着于一次性枪头内）。用洗涤液重悬上一步的磁珠，涡旋孵育，磁力架上吸取上清液弃掉。后用去离子水吹打混匀磁珠。该过程产生废实验耗材S3-1。 ④文库扩增富集将DNA建库试剂盒中的酶和引物溶液室温溶化后混匀后瞬间离心，使用酶、引物溶液、捕获产物（含磁珠）配制混合液。后在基因扩增仪上进行文库富集。富集完成后入库长期储存。 4、代谢组学类实验 ①标准曲线和质控样品的准备在室温下精确量取超纯水到试剂盒（标准物质冻干粉/质控品冻干粉）试剂瓶中，漩涡混匀至冻干粉完全溶解后备用（如瓶塞上存在粉末，请加塞后上下颠倒数次至冻干粉溶解），瓶塞不得混用。 ②内标溶液的准备取试剂盒中内标液，在室温下复温5分钟，开瓶直接使用。 ③样本前处理精密移取甲醇于96孔过滤板中，精密加入内标液，精密加入标准曲线和质控样品到样本中。置于96孔板震荡器，以涡旋10分钟。在96孔过滤板下方放置96孔接收板，离心5分钟；取下96孔接收板，封板后使用液相色谱串联质谱仪方法进行检测。该过程产生有机废气G4-1；废实验耗材S4-1；废弃样本S4-2。 ④样品检测取处理好的标准曲线和质控样品、生物样本，注入液质联用仪进行检测（仪器配套使用甲醇、乙腈）。该过程产生有机废气G4-1；废实验耗材S4-1；实验废液L4-1。 ⑤结论记录检测结果，出具检测报告。该过程产生实验废液L4-1。 5、灭活工序实验结束后，实验过程产生的实验废液、清洗废液、废弃样本、不合格品、损伤性废物及废实验耗材均需进行灭活处理。 ①灭菌锅高压蒸汽灭菌废弃样本、不合格品、损伤性废物及废实验耗材均使用灭菌锅进行高压蒸汽灭活处置，灭活后统一收集作危废处置。蒸汽灭活用水损耗后补充不外排。 ②化学灭活实验过程产生的实验废液、清洗废液含有细菌、细胞碎片等，需经灭活后统一收集作危废处置。实验废液、清洗废液倒入废液收集桶—加强碱NaOH将pH调至11~12.0达到灭活目的。 A、大多数细菌的最适环境pH值在6.0-8.0之间，可生存pH范围在4.0-10.0之间，在pH值为11~12.0以上时，微生物的物质平衡被打破，无法维持其正常的生命活动，达到杀菌的目的。 B、pH的剧烈变化（强碱）会使膜上的通道蛋白、转运蛋白以及信号通路蛋白等组分失去正常功能，导致细胞失去了选择性透过功能，细胞内外钠钾离子失衡。强碱环境，会使碱性蛋白质的功能基团中和并被降解，发生不可逆的破坏，达到灭活的目的。
原辅料变化：****实验室项目，实际运行过程中生殖类实验原辅料略微调整，酒精使用量较环评减少1kg，新增丙酮500mL（0.395kg）、硼氢化锂10g。硼氢化锂不产生废气，且实际有机溶剂使用量较环评有所减少，则有机溶剂挥发的有机废气减少，有机废气以非甲烷总烃计，故该变化不会增加污染物种类及排放量。

环保设施或环保措施

环评文件及批复要求：实际建设情况：变动情况及原因：是否属于重大变动：是否重新报批环境影响报告书(表)文件：

（1）废水本项目废水主要为超纯水制备废水、注射水制备废水、实验器皿清洗废水（不含氮磷）和生活污水，接入市政**工业园处理厂。（2）废气本项目实验过程中挥发的有机废气经二级活性炭吸附后（活性炭处理效率80%）通过高25m的P1、P2、P3排气筒高空排放。生物安全柜废气经自带高效过滤器（HEPA）过滤处理（过滤效率99.99%），70%再循环至工作区，30%通过排气口过滤排出。（3）噪声本项目主要噪声源为风机、超声波清洗机、离心机、超声破碎仪等产生的噪声，采取厂房隔音、距离衰减等措施，减轻对周围环境的影响。（4）固体废物项目产生的生活垃圾交由环卫部门统一处置，危废委托张家**处理中心有限公司处置，一般固废更换后由供应商直接运走，本项目固废均合理处置零排放。	（1）废水本项目废水主要为超纯水制备废水、注射水制备废水、实验器皿清洗废水（不含氮磷）和生活污水，接入市政**工业园处理厂。由于本项目位于新虹产业园内，与租赁产业园内多家企业共用污水接管口，无单独监控条件，故未对污水总排口废水进行取样监测。本项目仅有超纯水制备废水、注射水制备废水、实验器皿清洗废水（不含氮磷）和生活污水，水质简单，不含氮磷的公辅废水排放。本次仅对超纯水制备废水、注射水制备废水、实验器皿清洗废水（不含氮磷）进行检测。（2）废气本项目实验过程中挥发的有机废气经二级活性炭吸附后（活性炭处理效率80%）通过高25m的P1、P2、P3排气筒高空排放。生物安全柜废气经自带高效过滤器（HEPA）过滤处理（过滤效率99.99%），70%再循环至工作区，30%通过排气口过滤排出。（3）噪声本项目主要噪声源为风机、超声波清洗机、离心机、超声破碎仪等产生的噪声，采取厂房隔音、距离衰减等措施，减轻对周围环境的影响。（4）固体废物项目产生的生活垃圾交由环卫部门统一处置，危废委托张家**处理中心有限公司处置，一般固废更换后由供应商直接运走，本项目固废均合理处置零排放。企业设置了1个危险废物暂存场所，危险废物暂存场所设在室内，位于1楼南侧，占地面积28.6m2，能够防风、防雨、防渗；地面已设置环氧地坪；各类危险废物分类存放，并且张贴了标签；危废贮存库外张贴了危废标志，危废贮存库的设置基本符合《危险废物贮存污染控制标准》（GB 18597—2023）的有关要求。
（1）废气污染防治措施变动：本项目实际建设过程中，3套二级活性炭吸附装置活性炭装填量、活性炭种类及风量较环评有所调整。①1#二级活性炭吸附装置，风机风量由环评中10000m3/h调整至11000m3/h，活性炭由蜂窝炭调整为颗粒碳，装填量调整为1.2t；②2#二级活性炭吸附装置，风机风量由环评中15000m3/h调整至17000m3/h，活性炭由蜂窝炭调整为颗粒碳，装填量调整为1.5t；③3#二级活性炭吸附装置，风机风量由环评中8000m3/h调整至9000m3/h，活性炭由蜂窝炭调整为颗粒碳，装填量调整为0.8t。根据《实验室废气污染物控制技术规范》（DB32/T4455-2023），活性炭更换周期不宜超过6个月，则P1、P2、P3排气筒活性炭更换周期均为半年一次，废活性炭年产生量约为7.304t/a（约7.3t/a）。企业应加强对废气处理设施的维护保养，将更换的废活性炭委托有资质单位处理。（2）固体废物变动：①根据环评，企业设置一般固废暂存区1间，面积为3m2。实际未设置一般固废暂存区，本项目一般固废为超纯水及注射水制备废物，更换后由供应商直接运走，不在厂区暂存。②实际运行过程中废活性炭年产生量约为7.3t/a，危废代码为HW49 900-039-49，收集后委托有资质单位处置。

其他

环评文件及批复要求：实际建设情况：变动情况及原因：是否属于重大变动：是否重新报批环境影响报告书(表)文件：

本项目环评阶段设计将厂房1F西侧和2F西北侧部****公司使用。	实际建设过程中，3栋整体为企业自行使用。
项目平面布局调整：平面布局有调整，但厂界范围无变化，故不会导致环境防护距离范围变化。

3、污染物排放量

污染物现有工程（已建成的）本工程（本期建设的）总体工程总体工程（现有工程+本工程）排放方式实际排放量实际排放量许可排放量 “以新带老”削减量区域平衡替代本工程削减量实际排放总量排放增减量废水水量（万吨/年） COD（吨/年）氨氮（吨/年）总磷（吨/年）总氮（吨/年）悬浮物(吨/年) 废气气量（万立方米/年）二氧化硫（吨/年）氮氧化物（吨/年）颗粒物（吨/年）挥发性有机物（吨/年）

0.5742	1.0079	1.0079	0.5742	1.008	0.434
2.283	3.1505	3.1505	2.283	3.151	0.868
0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0
0.029	0.029	0.029	0.029	0.029	0
0	0	0	0	0	0
1.715	2.1489	2.1489	1.715	2.149	0.434
0	0	0	0	0	0	/
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0	0	0	0	0	0	/
0	0	0	0	0	0	/
0.035	0.076	0.076	0.035	0.076	0.041	/

4、环境保护设施落实情况

表1 水污染治理设施

序号设施名称执行标准实际建设情况监测情况达标情况

表2 大气污染治理设施

序号设施名称执行标准实际建设情况监测情况达标情况

3套二级活性炭吸附装置

**省《制药工业大气污染物排放标准》（DB32/4042-2021）

已建设

已监测

表3 噪声治理设施

序号设施名称执行标准实际建设情况监测情况达标情况

厂房隔声

《工业企业厂界环境噪声排放标准》（GB12348-2008）

已建设

已监测

表4 地下水污染治理设施

序号环评文件及批复要求验收阶段落实情况是否落实环评文件及批复要求

表5 固废治理设施

序号环评文件及批复要求验收阶段落实情况是否落实环评文件及批复要求

表6 生态保护设施

序号环评文件及批复要求验收阶段落实情况是否落实环评文件及批复要求

表7 风险设施

序号环评文件及批复要求验收阶段落实情况是否落实环评文件及批复要求

5、环境保护对策措施落实情况

依托工程